Afinitnн elektroforйza 1. Volnб elektroforйza V klasickй tzv. Elektroforйza na nosiинch Aby se odstranily nedostatky volnй elektroforйzy, tj. Rozhodujнcн vliv na stupeт disociace skupin separovanэch lбtek a tedy i na velikost jejich nбbojemб pH prostшedн. Naopak lбtky nesoucн nбboje se budou pohybovat ve smмru elektrody s opaиnэm nбbojem, tedy kationty ke katodм a anionty k anodм. Mб-li se tedy separovanб smмs dмlit pouze na zбkladм velikosti nбboujщ, nesmн gel brбnit molekulamб v jejich prщchodu.
| Author: | Mejora Mazuran |
| Country: | China |
| Language: | English (Spanish) |
| Genre: | History |
| Published (Last): | 28 June 2009 |
| Pages: | 447 |
| PDF File Size: | 8.68 Mb |
| ePub File Size: | 10.99 Mb |
| ISBN: | 873-5-94313-836-3 |
| Downloads: | 55640 |
| Price: | Free* [*Free Regsitration Required] |
| Uploader: | Kigatilar |
Afinitnн elektroforйza 1. Volnб elektroforйza V klasickй tzv. Elektroforйza na nosiинch Aby se odstranily nedostatky volnй elektroforйzy, tj. Rozhodujнcн vliv na stupeт disociace skupin separovanэch lбtek a tedy i na velikost jejich nбbojemб pH prostшedн. Naopak lбtky nesoucн nбboje se budou pohybovat ve smмru elektrody s opaиnэm nбbojem, tedy kationty ke katodм a anionty k anodм.
Mб-li se tedy separovanб smмs dмlit pouze na zбkladм velikosti nбboujщ, nesmн gel brбnit molekulamб v jejich prщchodu. Experimentбlnн uspoшбdбnн elektroforйzy geleu je dvojнho typu. Rozdнl mezi obмma typy je v umнstnмnн vzorku. Elektroforetickй podmнnky se uspoшбdajн tak, aby separovanй lбtky postupovaly shora dolщ pH, polha obou elektrod. Tнmto zpщsobem dojde k oddмlenйmu jнmбnн jednotlivэch frakcн. Doobrйho vэsledku separace lze dosбhnout pouze tehdy. SDS je anionaktivnн detergent, kterэ nese pomмrnм vysokэ nбboj, a proto ve vazbм na bнlkovinu vyrovnбvб nбbojovй rozdнly bнlkovin a ty se pohybujн v gelu jen podle velikosti.
Experimentбlnм byla prokбzбna pшнmб ъmмrnost elektroforetickй pohyblivosti komplexщ SDS-bнlkovina v polyakrylamidovйm gelu a logaritmu relativnн molekulovй hmotnosti. Takto stanovenй hodnoty rel. Zatнmco elektroforйza na nosiинch se provбdн za konstantnнho pH, k separaci pшi izoelektrickй fokusaci dochбzн v gradientu pH, kterэ se ustavн mezi dvмma elektrodami.
Separovanб lбtka se pohybuje vlivem el. Tam ztratн nбboj, zastavн se a bude se v tomto bodм koncentrovat. Vlivem elektrickйho pole se bude A pohybovat v takovйm smмru, aby dosбhla pH rovnйho svйmu izoelektrickйmu bodu. Tam se zastvн ztratн nбboj a bude se koncentrovat.
Syntetickй amfolyty, kterй jsou pшipraveny tнmto zpщsobem, se nazэvajн amfolytovй nosiиe. Gradient pH se иasto tvoшн v hustotnнm gradientu sacharуzy, kterэ stabilizuje fokusovanй elektrolyty proti difuzi.
Vэhodnй je, kombinujeme-li pшi tom dvм navzбjem nezбvislй elektroforetickй metody napш. Nejprve se nechб probмhnout elektroforйza v trubiиce. Gel z trubiиky se pak podйlnм pшipolymeruje k pшipravenй desce PAA gelu a nechб se probмhnout v druhйm smмru po desce.
Provбdн se na desce. Jde o kombinaci dvou principщ: v jednom smмru se lбtky separujн podle nбboje, ve druhйm podle velikosti molekuly. Jde tedy o kombinaci dмlenн podle isoelektrickйho bodu a podle velikosti molekuly. Tomuto zpщsobu elektroforйzy se шнkб vysokoъиinnб kapilбrnн elektroforйza HPCE a provбdн se nмkolika zpщsoby - jako volnб elektroforйza, gelovб elektroforйza, ale i jako izoelektrickб fokusace. Volnб kapilбrnн elektroforйza free-zone capillary electrophoresis Provбdн se v otevшenй kapilбшe naplnмnй elektrolytem.
K separaci dochбzн kombinacн vlivu elektroforetickй migrace a elektroosmotickйho toku. Elektroforetickou migracн rozumнme pohyb nabitэch molekul v elektrickйm poli. Elelktroosmotickэ tok je tok elektrolytu zpщsobenэ nбbojem vnitшnн stмny kapilбry a aplikovanэm potenciбlem. Ve styku s elektrolytem majн silanovй skupiny podйl vnitшnн stмny kapilбry tendenci ionizovat a vytvбшet tak na rozhranн stмny kapilбry a elektrolytu elektrickou dvojvrstvu. Tak se vytvбшн elektroosmotickэ tok smмrem ke katodм.
Kapilбrnн elektroforйza Neutrбlnн molekuly se pшi volnй kapilбrnн elektroforйze neseparujн, ale pohybujн se jako jeden pбs. SDS k elektrolytu. Neutrбlnн molekuly majн k nabitэm micelбm rщznou afinitu a podle nн se bмhem elektroforйzy separujн. Tato technika je znбma jako micelбrnн elektrokinetickб kapilбrnн chromatografie MECC. Na velikost proudu mб vliv i koncentrace elektrolytu a rozmмry kapilбry.
CUVIELLO REFERENCE MANUAL PDF
Elektroforeza kapilarna
.
BASOHLI PAINTINGS PDF
Kapilarna elektroforeza
.